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細胞凍存的程序降溫盒的使用注意事項

更新時間:2022-03-07 點擊次數:10768
   
細胞凍存有兩種方法:傳統的方法是利用冷存管處于4℃、-20℃、-80℃保存,程序降溫方法是利用程序降溫盒設定程序由室溫降低至-80℃,最后再放置到液氮槽中長期保存。程序降溫盒的使用注意事項如下:  
實驗室雖然有程序降溫凍存盒,但怎么使用一直都搞不明白,我覺得是不是應該把程序降溫凍存盒先從-80度移到室溫放一段時間(細胞剛開始還沒凍的時候就是室溫),然后把細胞放進去,再一起移到-80度,這樣才能實現程序降溫呢?時間使用長了,感覺里面的液體是不是異丙醇啊,使用時間長了會不會揮發或變質什么的,要不要添加或維護一下呢,還有有一只降溫盒因不小心給傾斜讓液體流出了部分,要補充嗎?  
經驗1:凍存盒外表面有刻度的吧,異丙醇液面要高于最底線。  
凍存盒肯定是先放在室溫,然后放進去細胞,置于-80,利用異丙醇實現梯度降溫啊。) 
根據論壇里的討論,異丙醇使用過一段時間后是要更換的,但是我一直沒換過,也沒發現很大問題。  
經驗2:我們實驗室凍存盒平時放4度,需要凍細胞時直接拿出來用就可以了。第二天轉移至液氮,貴重的細胞盡快轉移,不然會影響復蘇成活率的。一般是用5次就更換一下異丙醇。現在也有一些商品化凍存液可以直接丟進-80的,很方便,效果也不錯的。  
經驗3:異丙醇的量是要保證的,不能低于表明的線,否則不能起到很好的程序性降溫作用,我們是在4度放置,放了細胞后立馬放到-80度冰箱,第二天再轉移到液氮,效果很不錯。異丙醇熔點:-87.9度的色透明具有乙醇氣味的可燃性有毒液體。注意了有可燃性!急性毒性:口服-大鼠LD50:5840毫克/公斤;口服-小鼠LC50:3600毫克/公斤。刺激數據:眼睛-兔子100毫克/!請注意清理!  
經驗4:應該不可以把凍存盒放4°的,因為梯度降溫的起始點是室溫20°左右,所以從-80℃拿出來的凍存盒應該現在室溫靜置一段時間待其恢復到室溫再使用。而其中的異丙醇應使用6~7此后更換一次,而且保證液體量達到刻度線,否則降溫效果會受到影響。  
經驗5:凍存盒里的異丙醇一般是250ml,低于刻度了要加上,理論上是5次以后更換異丙醇,但是異丙醇對環境有害,我們可以多用幾次,只是少了的時候要加滿。還有凍存液里面的DMSO對細胞有毒性,尤其是室溫的時候,所以凍存盒和凍存液先放4°,等把細胞用凍存液重懸好了放在凍存盒里,還放回4°,等到出細胞間的時候再拿到-80°里面保存。過夜再轉入液氮。  
程序降溫盒這個梯度降溫可大大提高細胞凍存的存活率,由于程序降溫盒內存在*濃度的異丙醇和泡沫內襯,因此程序降溫盒也可以用于細胞復蘇  
 

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