胰酶的配制方法

　　Hanks液是常見的平衡鹽溶液(BSS)之一。D-Hanks液則是無鈣鎂離子的Hanks液。BSS與細胞生長狀態下的pH值、滲透壓及無菌狀態一致，且配方簡單，是組織培養基本用液，常用于配制培養基及其他用液，或洗細胞等，細胞在BSS中可生存幾個小時。 胰蛋白酶(胰酸)溶液是一種常用的細胞消化液，原代培養時用于處理組織塊，使細胞分離下來。傳代時用胰蛋白酶使培養細胞離開所貼附的培養瓶表面，并分散成單個細胞。胰蛋白酶主要采自牛或豬的胰臟，呈白色粉末狀，易潮解，應在低溫干燥處保存。胰酶的活力常用一份胰酶解離酪蛋白的份數表示，常用胰酶活力為1：125或1：250。一般來說濃度大、溫度高(勿高于37℃)、作用時間長，則對細胞分離能力大。但超過一定程度會損傷細胞，導致細胞傳代后不能貼壁或死亡。胰酶在pH 8.0、37℃時消化能力zui強。溶液中的Ca2+、Mg2+和血清會降低胰酶活力，所以配制胰酶時須用無Ca2+、Mg2+的D-Hanks液。當消化結束時，可加入少量血清或含血清的培養基以終止胰酶作用。 細胞傳代使用的胰酶濃度是0．25％或0．2％。用于原代細胞培養消化組織塊則為0．1％或0．125％。

(一)配制D-Hanks液

1．按表2—3—5稱取D-Hanks試劑。

2．依次加入上述試劑至800 mL蒸餾水中，溶解后定容至1 1000 mL。 3．高壓滅菌，10磅10 min。

(二)配制Hanks液

1．按表2—3—5稱取Hanks試劑。

2．配制Hanks時，需將CaCl2另溶解于100 mL的蒸餾水中。

3．依次加入上述試劑至700 mL蒸溜水中，溶解后再與CaCl2溶液一起定容至1 000 mL。

4．10磅，10 min高壓滅菌。

(三)配制胰蛋白酶消化液

1．D．Hanks液高壓滅菌之后，晾至室溫，4℃保存備用。

2．稱取一定量胰蛋白酶粉末于研磨器中(夏天時研磨器應放在冰浴中)，加入少量D－Hanks液研磨1 000次左右，調制成糊狀。再放入4℃預冷的適量D-Hanks液中，4℃下磁力攪拌使*溶解。

3．用NaHC03干粉將胰酶溶液的pH值調至8.0左右(胰酶作用的zui適pH值)，并加入0.02％EDTA以協助消化作用。

4．濾過除菌，－20℃凍存。

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